heal.abstract |
Η αποαδενυλίωση είναι διαδικασία βράχυνσης των πολυ(Α)-ουρών. Είναι το πρώτο και καθοριστικό βήμα της αποικοδόμησης των mRNAs σε ένα μεγάλο εύρος οργανισμών από τη ζύμη ως τα ανώτερα θηλαστικά. Τα ένζυμα που καταλύουν τη διαδικασία είναι γνωστά ως αποαδενυλάσες. Στο Arabidopsis thaliana η AtPARN είναι μια αποαδενυλάση, απαραίτητη κατά την πρώιμή φάση της ανάπτυξης. Βασιζόμενοι στην αναζήτησή μας in silico για νέες αποαδενυλάσες στο Arabidopsis, αναγνωρίσαμε και κλωνοποιήσαμε έναν πλήρη κλώνο cDNA που ανταποκρίνεται σε ένα πιθανό ομόλογο αποαδενυλάσης. Η ετερόλογη έκφραση του κλωνοποιημένου γονιδίου σε Ε. coli έδωσε μια πρωτεΐνη που αποικοδομεί πολυ(Α), in vitro και χαρακτηρίστηκε βιοχημικά από την ομάδα μας. Η δραστικότητα του ενζύμου εξαρτάται από την παρουσία ιόντων Mg(II), κατατάσσοντάς το στις νουκλεάσες που εξαρτώνται από μαγνήσιο. Η κατατομή της έκφρασης του mRNA της αποαδενυλάσης στο βλαστό μετά από ένα κύκλο φωτός/σκότους περιόδου 12/12h έδειξε πως τα επίπεδά του αυξάνονται λίγο πριν το σκοτάδι, υπαινίσσοντας έκφραση που ελέγχεται από τον κιρκάδιο ρυθμό. Ονομάζουμε την νέα πρωτεΐνη ESP, σε σχέση με το ομόλογο noctumin (NOC) που ελέγχεται από τον κιρκάδιο ρυθμό. Από όσο γνωρίζουμε, η ESP είναι η πρώτη κιρκάδια-ελεγχόμενη αποαδενυλάση στο Arabidopsis. |
el |